基于胶体金侧向层析技术的 HIV-1 P24蛋白半定量检测卡,可以用于相关慢病毒载体和假病毒 包装效率的快速评估(P24蛋白是慢病毒外壳中含量最大的标志性蛋白)。检测卡由层析膜、样品垫、金 标垫、层析膜、吸水纸、背板等结构组成。在层析膜上固定有羊抗鼠多克隆抗体(质控线)和 P24鼠单克 隆抗体(检测线);在金标垫上固定有胶体金标记的另外一株P24鼠单克隆抗体。待测样品滴加到样品垫, 通过毛细作用泳向金标垫,到达金标垫后,样品中的 P24蛋白与金标垫鼠抗 P24单克隆抗体结合形成复合 物。复合物移动到检测线时,被检测线上的另一株 P24鼠单克隆抗体所捕获。随着被捕获的复合物的堆积, 在检测线上呈现出酒红色。当复合物泳动到质控线,羊抗鼠多抗捕获胶体金标记的鼠单克隆抗体,呈现酒红色。通过判读层析膜上检测线和质控线是否显色,判断样品中是否存在 P24抗原。当样品中P24浓度变化时,检测线颜色的深浅与 P24浓度呈正相关,通过与比色卡(下图)比较,可以半定量待检标本中 P24蛋白浓度,并大致估算慢病毒的滴度。
T1 T2 T3 T4 T5
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条带编号 |
T1 |
T2 |
T3 |
T4 |
T5 |
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P24浓度 |
500ng/mL |
100ng/mL |
50ng/mL |
10ng/mL |
1ng/mL |
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LPs/ml* |
6.25×109 |
1.25×109 |
6.25×108 |
1.25×108 |
1.25×107 |
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TU/ml |
6.25×106-7 |
1.25×106-7 |
6.25×105-6 |
1.25×105-6 |
1.25×104-5 |